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Sulfo-CY3-DBCO 描述

Sulfo CY3-DBCO（磺酸化CY3-DBCO）

Sulfo CY3-DBCO 是一種水溶性熒光染料，用于銅離子自由的點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng)。它結(jié)合了Sulfo-CY3（磺酸化Cyanine 3，激發(fā)波長(zhǎng)550 nm，發(fā)射波長(zhǎng)570 nm）與DBCO（雙環(huán)辛炔）功能團(tuán)，后者可與疊氮類物質(zhì)進(jìn)行快速、特異性的 SPAAC 反應(yīng)（應(yīng)變促進(jìn)的疊氮-炔點(diǎn)擊反應(yīng)）。由于其磺酸基團(tuán)增強(qiáng)了水溶性，Sulfo CY3-DBCO 非常適用于在水性體系中標(biāo)記蛋白、抗體、核酸和多糖類疊氮修飾物。它在細(xì)胞標(biāo)記、活體成像、生物共軛等研究中具有廣泛應(yīng)用，尤其適合于無(wú)需催化劑的生物體系中。

一、基本信息

名稱：Sulfo-CY3-DBCO

中文名稱：磺酸化CY3-DBCO熒光探針

CAS:1782950-79-1

二、物化性質(zhì)

顏色和外觀：紅色至深橙色固體粉末

純度：≥95%（HPLC）

溶解度：*易溶于水、PBS緩沖液、DMSO和DMF

*性：高親水性，因引入磺酸基團(tuán)和PEG鏈，具有良好水溶性

pH穩(wěn)定性：pH 5.0–9.0 條件下穩(wěn)定

官能團(tuán)：含DBCO基團(tuán)（Dibenzocyclooctyne，具有應(yīng)變?nèi)步Y(jié)構(gòu)），可與疊氮（azide）類分子進(jìn)行銅離子無(wú)催化的點(diǎn)擊反應(yīng)（SPAAC）

三、光學(xué)性能

吸收波長(zhǎng)（λabs）：約 550 nm

發(fā)射波長(zhǎng)（λem）：約 570 nm

熒光性質(zhì)：高量子產(chǎn)率，信噪比高，適合細(xì)胞和組織成像

激發(fā)光源推薦：兼容532 nm 或561 nm激光器

四、儲(chǔ)存條件

儲(chǔ)存溫度：-20°C避光干燥儲(chǔ)存

有效期：至少12個(gè)月（密封避光保存）

避免條件：避免反復(fù)凍融，避免高溫和強(qiáng)光照射

復(fù)溶后使用期限：水溶液中建議4°C避光儲(chǔ)存，1周內(nèi)使用；長(zhǎng)期使用可分裝冷凍保存

五、制備簡(jiǎn)介

Sulfo-CY3-DBCO 通常通過(guò)以下方式合成：

1. 以CY3（Cyanine 3）為基礎(chǔ)染料進(jìn)行磺酸化修飾（Sulfo）以增強(qiáng)水溶性；

2. 將CY3通過(guò)共價(jià)鍵連接至一個(gè)活性PEG鏈段上（例如NH-PEG-COOH），該P(yáng)EG鏈段增強(qiáng)其空間位阻和生物相容性；

3. *后引入DBCO基團(tuán)，通過(guò)活性酯（NHS）或羧酸酰胺反應(yīng)鏈接至PEG端；

4. 成品通過(guò)HPLC和質(zhì)譜等方法純化和表征。

六、應(yīng)用領(lǐng)域

1. 生物正交標(biāo)記（Bioorthogonal Labeling）

Sulfo-CY3-DBCO 是生物正交反應(yīng)的典型探針，常用于點(diǎn)擊化學(xué)標(biāo)記疊氮修飾的生物大分子，如：

疊氮標(biāo)記的DNA、RNA、蛋白質(zhì)或糖類；

熒光示蹤細(xì)胞內(nèi)過(guò)程；

靶向納米粒子的標(biāo)記，如疊氮修飾的脂質(zhì)體、聚合物載體等。

2. 活體成像（Live-cell Imaging）

因其不依賴金屬離子（Cu-free），可以用于活細(xì)胞或活體動(dòng)物體系中進(jìn)行無(wú)毒熒光標(biāo)記，適合：

細(xì)胞表面分子追蹤；

納米藥物載體在活體組織中的分布監(jiān)測(cè)；

腦血屏障穿透實(shí)驗(yàn)中標(biāo)記熒光探針。

3. 免疫熒光染色（IF）

可用于原位免疫染色，尤其是用于原位雜交（FISH）或原位RNA成像（RNA-FISH）中的疊氮修飾探針染色。

4. 微陣列與微球編碼

用于高通量微陣列（microarray）或編碼微球中的熒光編碼。

七、相關(guān)文獻(xiàn)（中文翻譯與引用）

1. Chen et al., *Bioconjugate Chemistry*, 2020

   > 使用Sulfo-CY3-DBCO對(duì)疊氮化肽進(jìn)行無(wú)銅點(diǎn)擊標(biāo)記，實(shí)現(xiàn)了細(xì)胞特異性靶向與追蹤。實(shí)驗(yàn)表明該染料在細(xì)胞培養(yǎng)液中穩(wěn)定性高，熒光信號(hào)持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)。

2. Li et al., *Journal of Nanobiotechnology*, 2021

   > 通過(guò)將Sulfo-CY3-DBCO連接至疊氮修飾的納米脂質(zhì)體，實(shí)現(xiàn)納米遞送系統(tǒng)的可視化追蹤。研究證實(shí)其對(duì)細(xì)胞毒性*低，適用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。

3. Zhou et al., *Frontiers in Chemistry*, 2022

   > 在構(gòu)建pH響應(yīng)型智能聚合物探針時(shí)，將Sulfo-CY3-DBCO作為熒光標(biāo)簽，通過(guò)SPAAC反應(yīng)成功連接至疊氮修飾的聚合物主鏈，實(shí)現(xiàn)可控釋放下的熒光成像。

八、注意事項(xiàng)

使用前請(qǐng)確保反應(yīng)體系無(wú)游離還原劑（如DTT、TCEP）或銅離子；

本品應(yīng)在避光條件下使用，以避免熒光衰減；

建議使用HPLC純度的疊氮底物以提高標(biāo)記效率；

熒光信號(hào)可通過(guò)常規(guī)流式細(xì)胞儀或共聚焦顯微鏡進(jìn)行檢測(cè)。