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氯磷酸鹽脂質(zhì)體清除骨巨噬細胞的文獻匯總

巨噬細胞是一種多用途的細胞群，在清除局部組織中的細菌、將警報信號翻譯給其他免疫細胞、分泌細胞因子建立局部穩(wěn)態(tài)免疫細胞網(wǎng)絡(luò)、參與T細胞在薄板內(nèi)的再刺激和維持方面起著至關(guān)重要的作用。

氯膦酸鹽脂質(zhì)體（Clodronate Liposomes）是目前*為成熟，*為經(jīng)濟且*為理想的一種有效的巨噬細胞清除工具。脂質(zhì)體包裹氯膦酸鹽通常用于清除巨噬細胞群，因為它一旦被巨噬細胞吞噬，被溶酶體酶消化，游離氯膦酸鹽在細胞質(zhì)內(nèi)積累，當濃度超過一定閾值時就會產(chǎn)生功能上不可逆的抑制和細胞凋亡。由于氯膦酸鹽在血液中的半衰期只有幾分鐘，游離的氯膦酸鹽會被腎臟迅速清除。借助腹腔，尾靜脈等多種給藥方式實現(xiàn)不同組織部位中巨噬細胞的清除。Clophosome®（氯氟松）是目前市場上*理想的用于體內(nèi)/體外巨噬細胞清除的氯磷酸二鈉脂質(zhì)體。

在大腦中，常駐小膠質(zhì)細胞與血管周圍和腦膜巨噬細胞一起由胚胎卵黃囊前體產(chǎn)生，占所有腦細胞的10%。在這些研究中，氯膦酸鹽脂質(zhì)體通過腦內(nèi)或腦室注射給藥。小膠質(zhì)細胞耗竭的不同效果可能是由于疾病模型、動物種類、動物年齡或氯膦酸鈉給藥劑量和時間的不同造成的。

以下是小編帶來的幾篇文獻整理，供大家參考。

文獻一

動物模型：C57BL/6J小鼠，使用海馬切片培養(yǎng)直接研究小膠質(zhì)細胞

巨噬細胞清除脂質(zhì)體：Combo Kit: Clophosome®, Clophosome®- A And Control Liposomes (Cat#F70101C-AC)

巨噬細胞清除方法：在體外試驗天數(shù)的第0天和第3天，在培養(yǎng)基中加入0.05 mg/mL Clophosome-A 培養(yǎng)24小時。對照組給予等量陰離子脂質(zhì)體對照加入到培養(yǎng)基中。處理后，切片用加熱的PBS仔細沖洗三次，并用新鮮培養(yǎng)基培養(yǎng)。

巨噬細胞清除結(jié)果：

在氯膦酸處理的培養(yǎng)物中，小膠質(zhì)細胞被顯著去除(圖A, 3)，而氯膦酸鈉對神經(jīng)元密度無影響

參考文獻：Araki T, Ikegaya Y, Koyama R. Microglia attenuate the kainic acid-induced death of hippocampal neurons in slice cultures. Neuropsychopharmacol Rep. 2020;40(1):85-91. doi:10.1002/npr2.12086

文獻二

動物模型：C57BL/6J小鼠 

巨噬細胞清除脂質(zhì)體：Clophosome® - Clodronate Liposomes (Neutral)（F70101C-N-2）

巨噬細胞清除方法：每只小鼠給藥70 μg，相當于10μL體積，如下圖所示，注射到左心室

巨噬細胞清除結(jié)果：

腦室內(nèi)的氯膦酸鈉導(dǎo)致血管周圍CD206陽性巨噬細胞的清除，但不影響小膠質(zhì)細胞(P2Y12R標記，綠色)。用內(nèi)皮標記物番茄凝集素(藍色)觀察血管。

氯膦酸脂質(zhì)體或PBS注射后血管周圍巨噬細胞數(shù)量的定量分析。

參考文獻：Császár E, Lénárt N, Cserép C, et al. Microglia modulate blood flow, neurovascular coupling, and hypoperfusion via purinergic actions. J Exp Med. 2022;219(3):e20211071. doi:10.1084/jem.20211071

文獻三

動物模型：C57BL/6雄性小鼠(8 ~ 10周齡，23 ~ 25 g)；C57BL/6背景Cx3cr1GFP/+小鼠(雄性，8 ~ 10周齡，23-25 g)

巨噬細胞清除脂質(zhì)體：

Clophosome®-A - Clodronate Liposomes (Anionic)（Cat#F70101C-A)

DiI Fluorescent Control Liposomes for Clophosome® -A (Anionic) (2mL) (Cat#F70101F-A-2)

巨噬細胞清除方法：

Cx3cr1GFP/+小鼠和C57BL/6小鼠按先前報道的方法，將1 μL的Liposomes 或1 μL的對照Dil-Lip注射到左紋狀體(距囟門前方0.8毫米，外側(cè)2.0毫米，深度為3.0毫米)

巨噬細胞清除結(jié)果：

A.

注射Clodronate liposomes于24小時開始在腦實質(zhì)中消耗小膠質(zhì)細胞，注射1 μL Dil-Lip后第1天的一系列腦切片（脂質(zhì)體用紅色熒光染料Dil標記）進入紋狀體（圖A第一排）或腦側(cè)室（圖A第二排）

代表性圖像顯示，紋狀體注射 Dil-Lip或Clodronate liposomes后不同時間點Cx3cr1-GFP+小膠質(zhì)細胞（綠色）的耗竭。（圖A第三、四排）顯示放大后的小膠質(zhì)細胞圖像。

B.

在Clodronate liposomes注射后的第1、4、7天，用流式細胞術(shù)分析Cx3cr1-GFP+小膠質(zhì)細胞。圖中顯示了代表性的點圖，并顯示了紋狀體細胞群中Cx3cr1-GFP+的百分比。紅色：Cx3cr1-GFP?細胞群；綠色：Cx3cr1-GFP+細胞群（圖C）。

圖表顯示注射Clodronate liposomes后紋狀體和皮層中剩余Cx3cr1-GFP+種群的百分比（圖D）。

參考文獻：Han X, Li Q, Lan X, El-Mufti L, Ren H, Wang J. Microglial Depletion with Clodronate Liposomes Increases Proinflammatory Cytokine Levels, Induces Astrocyte Activation, and Damages Blood Vessel Integrity. Mol Neurobiol. 2019;56(9):6184-6196. doi:10.1007/s12035-019-1502-9

文獻四

動物模型：大鼠幼崽 (P9- P10)

巨噬細胞清除脂質(zhì)體：

Combo Kit: Clophosome®, Clophosome®- A And Control Liposomes (Cat#F70101C-AC)

巨噬細胞清除方法：海馬切片培養(yǎng)中加入氯膦酸脂質(zhì)體體外18天，濃度0.5 mg/mL（氯膦酸共500 μg），24小時后，用培養(yǎng)基輕輕洗滌培養(yǎng)物，并給予另一劑量的0.5 mg/mL氯膦酸脂質(zhì)體，再孵育24小時，此時再次洗滌培養(yǎng)物，置于新培養(yǎng)基中，孵育7天。第7天，培養(yǎng)的小膠質(zhì)細胞耗盡，準備進行后續(xù)實驗。

巨噬細胞清除結(jié)果：

小膠質(zhì)細胞、星形膠質(zhì)細胞、少突膠質(zhì)細胞和神經(jīng)元的代表性細胞特異性標記染色（Iba1，
GFAP, CNPase和NeuN）分別顯示與對照組（第一排）相比氯膦酸脂質(zhì)體處理（第二排）的切片小膠質(zhì)細胞耗竭，且對其他細胞類型沒有影響（比例尺，20毫米）。

參考文獻：

Pusic KM, Pusic AD, Kemme J, Kraig RP. Spreading depression requires microglia and is decreased by their M2a polarization from environmental enrichment. Glia. 2014;62(7):1176-1194. doi:10.1002/glia.22672