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產(chǎn)品名稱(chēng)：FITC-PEG-COOH，熒光素PEG羧基

實(shí)驗(yàn)操作指南

1. 生物分子偶聯(lián)

EDC/NHS法：

將FITC-PEG-COOH（1 eq）溶于MES緩沖液（pH 5.5），加入EDC（4 eq）和NHS（10 eq），室溫活化30分鐘。

加入含氨基的目標(biāo)分子（如抗體，1.2 eq），4℃反應(yīng)12小時(shí)，透析純化。

標(biāo)記效率檢測(cè)：熒光分光光度計(jì)測(cè)定FITC濃度（ε=68,000 M?1cm?1），計(jì)算偶聯(lián)比（FITC/蛋白）。

2. 納米材料修飾

金納米顆粒（AuNPs）：

制備13 nm AuNPs，加入FITC-PEG-COOH（50 eq相對(duì)于Au），室溫?cái)嚢?4小時(shí)。

離心洗滌，Zeta電位從-30 mV變?yōu)?20 mV（因FITC帶負(fù)電），熒光強(qiáng)度與PEG長(zhǎng)度正相關(guān)（2 kDa PEG熒光強(qiáng)度是5 kDa的1.5倍）。

3. 細(xì)胞成像實(shí)驗(yàn)

步驟：

將FITC-PEG-COOH標(biāo)記的抗體與細(xì)胞共孵育30分鐘，PBS洗滌后熒光顯微鏡觀察，綠色熒光信號(hào)強(qiáng)度與抗體濃度呈線性關(guān)系（R2=0.99）。

優(yōu)勢(shì)與局限性

優(yōu)勢(shì)：

雙功能設(shè)計(jì)：PEG提高水溶性和生物相容性，F(xiàn)ITC提供高靈敏熒光信號(hào)。

反應(yīng)活性高：羧基可直接偶聯(lián)含氨基分子，無(wú)需額外活化步驟。

應(yīng)用廣泛：適用于蛋白質(zhì)、核酸、納米材料等多種底物標(biāo)記。

局限性：

光漂白性：FITC在持續(xù)光照下易淬滅，需優(yōu)化成像條件（如降低激光功率）。

pH敏感性：熒光強(qiáng)度在pH<5時(shí)顯著下降，不適用于酸性環(huán)境（如溶酶體）。

背景干擾：血清中FITC自發(fā)熒光可能導(dǎo)致假陽(yáng)性，需優(yōu)化洗滌步驟。

溫馨提示：僅用于科研，不能用于人體實(shí)驗(yàn)！wyh

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